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鹽酸克倫特羅ELISA檢測試劑使用說明書

發布于:2013-12-06

文章來源:

鹽酸克倫特羅ELISA檢測試劑盒使用說明書

原理及用途

本試劑盒接纳間接競爭ELISA要领檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的鹽酸克倫特羅(Clenbuterol HydrochlorideCle),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標准品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標准品或樣品溶液,樣本中的鹽酸克倫特羅和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗鹽酸克倫特羅抗體,加入酶標記物後,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含鹽酸克倫特羅含量成負相關,與標准曲線比較即可得出樣本中鹽酸克倫特羅的殘留量。

技術指標

2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)

2.2 反應模式:25℃,30min15min

2.3 檢測下限:

尿液樣本……………………………… 0.1ppb

组 织(处置法一)…………………… 0.4ppb

组 织(处置法二)…………………… 0.1ppb

饲料样本 ………………………………1ppb

2.4 交织反應率:

克倫特羅(Clenbuterol)………………100%

特普他林(Terbutalin)………………<1%

馬布特羅(Mabuterol)…………………<1%

溴布特羅(Brombuterol)………………<1%

沙丁胺醇(Salbutamol)…………………<1%

萊克多巴胺(Ractopamine)……………<1%

2.5 樣本接纳率:

尿樣………………………………………95%±10%

組織………………………………………85%±15%

飼料………………………………………85%±15%

試劑盒組成

酶標板…………………………………96孔

標准液(綠蓋):各1ml

0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9 ppb,2.7ppb,8.1ppb

高標准液(紅蓋):100ppb……………1ml

酶標記物 (紅蓋)…………………………7ml

抗體事情液 (藍蓋)………………………10ml

底物液A (白盖)…………………………7ml

底物液B(黑蓋)……………………………7ml

終止液(黃蓋)……………………………7ml

20X浓缩洗涤液(透明盖)………………40 ml

10X复溶液(黄盖)………………………50 ml

說明書………………………………………1份

需要的器材和試劑

4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、離心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:單道20?l-200?l,100?l-1000?l、多道300?l

4.3 試劑:氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃HCl、乙腈、甲醇、正己烷、無水硫酸鈉

樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

    實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取差异的試劑時要更換吸頭。實驗之前須檢查各種實驗器具是否幹淨,必須使用潔淨實驗器具,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.2 配液:

配液1:0.1M HCl 溶液

    取0.86ml濃HCl加去離子水至100ml。

配液20.1M NaOH 溶液

    稱取0.4g NaOH加去離子水至100ml

配液3:乙腈-0.1M HCl 溶液

    V乙腈:V0.1M HCl =84:16

配液4:複溶液

    用去離子水將10×複溶液按1:9 體積比進行稀釋,用于樣本的複溶,複溶液在4℃環境可生存一個月。

5.3 樣本前處理步骤:

實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.3.1 尿樣處理要领:

    直接取20?l清亮尿樣進行測定(渾濁尿樣需要過濾或經4000r/min離心5min,以获得清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍生存。

尿樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.2 組織樣本處理要领一:

   稱取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml複溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩後放入85℃水浴10min后再離心)。取20?l上清液進行分析。

樣本稀釋倍數:4    檢測下限:0.4ppb

5.3.3 組織樣本處理要领二:

1)稱取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml乙腈-0.1M HCl,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min

2)取上清液3ml,加入2ml 0.1M NaOH,加入6ml乙酸乙酯,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min,取全部上清在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全幹燥;

3)加入1ml 複溶液混淆振蕩30s,取20?l進行分析。

樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.4 飼料樣本處理要领:

1)稱取均质后的饲料样品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min

2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮氣吹幹,用1 ml複溶液溶解幹燥的殘留物,再加入1mL正己烷混淆30s;室溫4000r/min以上離心5min

3)取20?l下层進行分析。

    樣本稀釋倍數:10    檢測下限:1ppb

酶聯免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出,置于室溫平衡30min以上洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢複到室溫以充实溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,生存于2-8℃。

實驗開始前需:將20×濃縮洗滌液用去離子水1:19稀釋成事情洗滌液。

6.1     號:将样本和尺度品对应微孔按序編号,每个样本和尺度品做2孔平行,並記錄標准孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應:加標准品或樣本20?l/孔到各自的微孔中,然後加酶標記物50?l/孔,再加入80?l/孔的抗體事情液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鍾。

6.3     滌:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩幹,用事情洗滌液250?l/孔充实洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破)。

6.4     色:每孔加入底物液A 50?l,再加底物液B 50?l,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鍾。

6.5     止:每孔加入終止液50?l,輕輕振蕩混匀,終止反映。

6.6 測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。测定应終止反映后在10分鍾內完成。

結果分析

7.1 百分吸光率的計算

    標准品或樣本的百分吸光率即是標准品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標准(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A00ppb標准溶液的平均吸光度值

7.2 標准曲線的繪制與計算

    以標准品百分吸光率爲縱坐標,對應的標准品濃度(ppb)的對數爲橫坐標,繪制標准品的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標准曲線中,從標准曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即爲樣本中待測物的實際濃度。

    若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的准確、快速分析。(歡迎來電索取)

注意事項

8.1 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會導致所有標准的OD值偏低。

8.2 

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鹽酸克倫特羅ELISA檢測試劑使用說明書

發布于:2013-12-06

鹽酸克倫特羅ELISA檢測試劑盒使用說明書

原理及用途

本試劑盒接纳間接競爭ELISA要领檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的鹽酸克倫特羅(Clenbuterol HydrochlorideCle),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標准品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標准品或樣品溶液,樣本中的鹽酸克倫特羅和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗鹽酸克倫特羅抗體,加入酶標記物後,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含鹽酸克倫特羅含量成負相關,與標准曲線比較即可得出樣本中鹽酸克倫特羅的殘留量。

技術指標

2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)

2.2 反應模式:25℃,30min15min

2.3 檢測下限:

尿液樣本……………………………… 0.1ppb

组 织(处置法一)…………………… 0.4ppb

组 织(处置法二)…………………… 0.1ppb

饲料样本 ………………………………1ppb

2.4 交织反應率:

克倫特羅(Clenbuterol)………………100%

特普他林(Terbutalin)………………<1%

馬布特羅(Mabuterol)…………………<1%

溴布特羅(Brombuterol)………………<1%

沙丁胺醇(Salbutamol)…………………<1%

萊克多巴胺(Ractopamine)……………<1%

2.5 樣本接纳率:

尿樣………………………………………95%±10%

組織………………………………………85%±15%

飼料………………………………………85%±15%

試劑盒組成

酶標板…………………………………96孔

標准液(綠蓋):各1ml

0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9 ppb,2.7ppb,8.1ppb

高標准液(紅蓋):100ppb……………1ml

酶標記物 (紅蓋)…………………………7ml

抗體事情液 (藍蓋)………………………10ml

底物液A (白盖)…………………………7ml

底物液B(黑蓋)……………………………7ml

終止液(黃蓋)……………………………7ml

20X浓缩洗涤液(透明盖)………………40 ml

10X复溶液(黄盖)………………………50 ml

說明書………………………………………1份

需要的器材和試劑

4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、離心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:單道20?l-200?l,100?l-1000?l、多道300?l

4.3 試劑:氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃HCl、乙腈、甲醇、正己烷、無水硫酸鈉

樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

    實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取差异的試劑時要更換吸頭。實驗之前須檢查各種實驗器具是否幹淨,必須使用潔淨實驗器具,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.2 配液:

配液1:0.1M HCl 溶液

    取0.86ml濃HCl加去離子水至100ml。

配液20.1M NaOH 溶液

    稱取0.4g NaOH加去離子水至100ml

配液3:乙腈-0.1M HCl 溶液

    V乙腈:V0.1M HCl =84:16

配液4:複溶液

    用去離子水將10×複溶液按1:9 體積比進行稀釋,用于樣本的複溶,複溶液在4℃環境可生存一個月。

5.3 樣本前處理步骤:

實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.3.1 尿樣處理要领:

    直接取20?l清亮尿樣進行測定(渾濁尿樣需要過濾或經4000r/min離心5min,以获得清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍生存。

尿樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.2 組織樣本處理要领一:

   稱取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml複溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩後放入85℃水浴10min后再離心)。取20?l上清液進行分析。

樣本稀釋倍數:4    檢測下限:0.4ppb

5.3.3 組織樣本處理要领二:

1)稱取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml乙腈-0.1M HCl,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min

2)取上清液3ml,加入2ml 0.1M NaOH,加入6ml乙酸乙酯,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min,取全部上清在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全幹燥;

3)加入1ml 複溶液混淆振蕩30s,取20?l進行分析。

樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.4 飼料樣本處理要领:

1)稱取均质后的饲料样品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min

2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮氣吹幹,用1 ml複溶液溶解幹燥的殘留物,再加入1mL正己烷混淆30s;室溫4000r/min以上離心5min

3)取20?l下层進行分析。

    樣本稀釋倍數:10    檢測下限:1ppb

酶聯免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出,置于室溫平衡30min以上洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢複到室溫以充实溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,生存于2-8℃。

實驗開始前需:將20×濃縮洗滌液用去離子水1:19稀釋成事情洗滌液。

6.1     號:将样本和尺度品对应微孔按序編号,每个样本和尺度品做2孔平行,並記錄標准孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應:加標准品或樣本20?l/孔到各自的微孔中,然後加酶標記物50?l/孔,再加入80?l/孔的抗體事情液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鍾。

6.3     滌:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩幹,用事情洗滌液250?l/孔充实洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破)。

6.4     色:每孔加入底物液A 50?l,再加底物液B 50?l,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鍾。

6.5     止:每孔加入終止液50?l,輕輕振蕩混匀,終止反映。

6.6 測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。测定应終止反映后在10分鍾內完成。

結果分析

7.1 百分吸光率的計算

    標准品或樣本的百分吸光率即是標准品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標准(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A00ppb標准溶液的平均吸光度值

7.2 標准曲線的繪制與計算

    以標准品百分吸光率爲縱坐標,對應的標准品濃度(ppb)的對數爲橫坐標,繪制標准品的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標准曲線中,從標准曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即爲樣本中待測物的實際濃度。

    若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的准確、快速分析。(歡迎來電索取)

注意事項

8.1 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會導致所有標准的OD值偏低。

8.2 

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