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萊克多巴胺ELISA檢測試劑盒使用說明書

發布于:2013-12-06

文章來源:

萊克多巴胺ELISA檢測試劑盒

使用說明書

 


1 原理及用途

本試劑盒接纳間接競爭ELISA要领檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺(RactopamineRac),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標准品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標准品或樣品溶液,樣本中的萊克多巴胺和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體,加入酶標記物後,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負相關,與標准曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

2 技術指標

2.1 试剂盒灵敏度:0.1ppb(ng/ml)

2.2 反映模式:25℃,30min15min

2.3 檢測下限:

尿液樣本………………………………0.1ppb

組織(處理要领一)…………………0.4ppb

肌肉樣本(處理要领二)……………0.1ppb

肝髒樣本(處理要领二)……………0.2ppb

飼料樣本………………………………1ppb

2.4 交织反映率:

莱克多巴胺 ………………………… 100%

多巴酚丁胺……………………………< 1%

克倫特羅………………………………<0.1%

沙丁胺醇………………………………<0.1%

2.5 样本接纳率:

尿樣………………………………………95%±10%

組織………………………………………90%±15%

飼料………………………………………90%±15%

3 試劑盒組成

酶標板…………………………………96

標准液(綠蓋):各1ml

0ppb,0.1ppb0.3ppb0.9 ppb2.7ppb8.1ppb

高標准液(紅蓋):100ppb……………1ml

酶標記物 (紅蓋)…………………………5.5ml

抗體事情液 (藍蓋)………………………9ml

底物液A (白蓋)…………………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………………6ml

終止液(黃蓋)……………………………6ml

20X濃縮洗滌液(透明蓋)………………40 ml

10X複溶液(黃蓋)………………………50 ml

說明書………………………………………1

4 需要的器材和試劑

4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、離心机、刻度移液管、天平(感量0.01g

4.2 微量移液器:单道20?l-200?l100?l-1000?l、多道300?l

4.3 试剂:正己烷、乙腈、甲醇、无水硫酸钠

5 樣本前處理

5.1 样本处置前须知:

    实验中必须使用一次性吸头,在吸取差异的试剂时要更换吸头。实验之前须检查种种实验器具是否洁净,必须使用洁净实验器具,以制止污染滋扰实验结果。

5.2 配液:

配液1:複溶液

    用去离子水将10×複溶液按1:9 體積比進行稀釋,用于樣本的複溶,複溶液在4℃環境可生存一個月。

5.3 樣本前處理步骤:

實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.3.1 尿樣處理要领:

    直接取20?l清亮尿樣進行測定(渾濁尿樣需要過濾或經4000r/min離心5min,以获得清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍生存。

尿樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.2 組織樣本處理要领一:

   称取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml複溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩後放入85℃水浴10min后再離心)。取20?l上清液進行分析。

樣本稀釋倍數:4    檢測下限:0.4ppb

5.3.3 組織樣本(肌肉和肝髒處理要领二:

1)稱取均質後的組織樣本2±0.05g ,加入8ml乙腈溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min

2)取上清液5ml,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全幹燥;

▲肌肉樣本:

    加入1ml 複溶液混淆振蕩30s,取20?l用于分析。

肌肉樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

▲肝髒樣本:

    加入2ml正己烷振蕩溶解,再加入1ml 去離子水混淆振蕩30s,室溫4000r/min以上離心5min,去除上層;取50?l下層與50?l複溶液混勻;取20?l用于分析。

肝樣本稀釋倍數:2    檢測下限:0.2ppb

5.3.4 飼料樣本處理要领:

1)稱取均質後的飼料樣品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min

2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮氣吹幹,用1 ml複溶液溶解幹燥的殘留物,再加入1mL正己烷混淆30s;室溫4000r/min以上離心5min

3)取20?l下層進行分析。

樣本稀釋倍數:10    檢測下限:1ppb

6 酶聯免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢複到室溫以充实溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,生存于2-8℃。

實驗開始前需:將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成事情洗滌液。

6.1     號:将样本和尺度品对应微孔按序編号,每个样本和尺度品做2孔平行,並記錄標准孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應:加標准品或樣本20?l/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50?l/孔,再加入80?l/孔的抗體事情液,用盖板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鍾。

6.3     滌:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩幹,用事情洗滌液250?l/孔充实洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破)。

6.4     色:每孔加入底物液A 50?l,再加底物液B 50?l,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鍾。

6.5     止:每孔加入終止液50?l,輕輕振蕩混匀,終止反映。

6.6 測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。测定应終止反映后在10分鍾內完成。

7 結果分析

7.1 百分吸光率的盘算

    尺度品或样本的百分吸光率即是尺度品或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个尺度(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標准溶液的平均吸光度值

7.2 尺度曲线的绘制与盘算

    以尺度品百分吸光率为纵坐标,对应的尺度品浓度(ppb)的對數爲橫坐標,繪制標准品的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標准曲線中,從標准曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即爲樣本中待測物的實際濃度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行盘算,更便于大量样本的准确、快速分析。(接待来電索取)

8 注意事項

8.1 室温低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會導致所有標准的OD值偏低。

8.2 在洗板历程中如果泛起板孔干燥的情况,则会泛起尺度曲线不成线性,重复性欠好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

8.3 混淆要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再現性,很洪流平上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育历程中,用盖板膜封住微孔板,制止光线照射。

8.5 不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀脏]褂没嵋鹆槊舳鹊慕档汀2灰涣魇褂貌钜炫攀约梁兄械氖约痢

8.6 顯色液若有任何颜色讲明变质,应当弃之。0標准的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,体现試劑可能變質。

8.7 反映終止液为稀硫酸,制止接触皮肤。

9 貯藏及生存期

儲藏條件:試劑盒于2-8℃生存,不要冷凍。

保 质 期:该产物有效期为1年,生産日期見包裝盒。

 

【生産企業】

企業名稱:深圳williamhill体育网页版生物技術有限公司

    址:深圳市灼烁新區灼烁高新園西片區森陽電子科技園一棟6BB2

    話:0755-23499189      

    真:0755-23499025

    編:518132              

    Http:

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備案號: 粵ICP備16104644號

萊克多巴胺ELISA檢測試劑盒使用說明書

發布于:2013-12-06

萊克多巴胺ELISA檢測試劑盒

使用說明書

 


1 原理及用途

本試劑盒接纳間接競爭ELISA要领檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的萊克多巴胺(RactopamineRac),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標准品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標准品或樣品溶液,樣本中的萊克多巴胺和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體,加入酶標記物後,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺含量成負相關,與標准曲線比較即可得出樣本中萊克多巴胺的殘留量。

2 技術指標

2.1 试剂盒灵敏度:0.1ppb(ng/ml)

2.2 反映模式:25℃,30min15min

2.3 檢測下限:

尿液樣本………………………………0.1ppb

組織(處理要领一)…………………0.4ppb

肌肉樣本(處理要领二)……………0.1ppb

肝髒樣本(處理要领二)……………0.2ppb

飼料樣本………………………………1ppb

2.4 交织反映率:

莱克多巴胺 ………………………… 100%

多巴酚丁胺……………………………< 1%

克倫特羅………………………………<0.1%

沙丁胺醇………………………………<0.1%

2.5 样本接纳率:

尿樣………………………………………95%±10%

組織………………………………………90%±15%

飼料………………………………………90%±15%

3 試劑盒組成

酶標板…………………………………96

標准液(綠蓋):各1ml

0ppb,0.1ppb0.3ppb0.9 ppb2.7ppb8.1ppb

高標准液(紅蓋):100ppb……………1ml

酶標記物 (紅蓋)…………………………5.5ml

抗體事情液 (藍蓋)………………………9ml

底物液A (白蓋)…………………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………………6ml

終止液(黃蓋)……………………………6ml

20X濃縮洗滌液(透明蓋)………………40 ml

10X複溶液(黃蓋)………………………50 ml

說明書………………………………………1

4 需要的器材和試劑

4.1 仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、離心机、刻度移液管、天平(感量0.01g

4.2 微量移液器:单道20?l-200?l100?l-1000?l、多道300?l

4.3 试剂:正己烷、乙腈、甲醇、无水硫酸钠

5 樣本前處理

5.1 样本处置前须知:

    实验中必须使用一次性吸头,在吸取差异的试剂时要更换吸头。实验之前须检查种种实验器具是否洁净,必须使用洁净实验器具,以制止污染滋扰实验结果。

5.2 配液:

配液1:複溶液

    用去离子水将10×複溶液按1:9 體積比進行稀釋,用于樣本的複溶,複溶液在4℃環境可生存一個月。

5.3 樣本前處理步骤:

實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭,以制止汙染幹擾實驗結果。

5.3.1 尿樣處理要领:

    直接取20?l清亮尿樣進行測定(渾濁尿樣需要過濾或經4000r/min離心5min,以获得清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍生存。

尿樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

5.3.2 組織樣本處理要领一:

   称取均质后的组织样本2±0.05g ,加入6ml複溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩後放入85℃水浴10min后再離心)。取20?l上清液進行分析。

樣本稀釋倍數:4    檢測下限:0.4ppb

5.3.3 組織樣本(肌肉和肝髒處理要领二:

1)稱取均質後的組織樣本2±0.05g ,加入8ml乙腈溶液,充方K袷2min,室溫4000r/min以上離心10min

2)取上清液5ml,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全幹燥;

▲肌肉樣本:

    加入1ml 複溶液混淆振蕩30s,取20?l用于分析。

肌肉樣本稀釋倍數:1    檢測下限:0.1ppb

▲肝髒樣本:

    加入2ml正己烷振蕩溶解,再加入1ml 去離子水混淆振蕩30s,室溫4000r/min以上離心5min,去除上層;取50?l下層與50?l複溶液混勻;取20?l用于分析。

肝樣本稀釋倍數:2    檢測下限:0.2ppb

5.3.4 飼料樣本處理要领:

1)稱取均質後的飼料樣品1.0±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無水硫酸鈉,振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min

2)吸出離心后的上清液1ml,于56℃氮氣吹幹,用1 ml複溶液溶解幹燥的殘留物,再加入1mL正己烷混淆30s;室溫4000r/min以上離心5min

3)取20?l下層進行分析。

樣本稀釋倍數:10    檢測下限:1ppb

6 酶聯免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢複到室溫以充实溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,生存于2-8℃。

實驗開始前需:將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成事情洗滌液。

6.1     號:将样本和尺度品对应微孔按序編号,每个样本和尺度品做2孔平行,並記錄標准孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應:加標准品或樣本20?l/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50?l/孔,再加入80?l/孔的抗體事情液,用盖板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鍾。

6.3     滌:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩幹,用事情洗滌液250?l/孔充实洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用幹淨的槍頭刺破)。

6.4     色:每孔加入底物液A 50?l,再加底物液B 50?l,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鍾。

6.5     止:每孔加入終止液50?l,輕輕振蕩混匀,終止反映。

6.6 測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。测定应終止反映后在10分鍾內完成。

7 結果分析

7.1 百分吸光率的盘算

    尺度品或样本的百分吸光率即是尺度品或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个尺度(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標准溶液的平均吸光度值

7.2 尺度曲线的绘制与盘算

    以尺度品百分吸光率为纵坐标,对应的尺度品浓度(ppb)的對數爲橫坐標,繪制標准品的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標准曲線中,從標准曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即爲樣本中待測物的實際濃度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行盘算,更便于大量样本的准确、快速分析。(接待来電索取)

8 注意事項

8.1 室温低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會導致所有標准的OD值偏低。

8.2 在洗板历程中如果泛起板孔干燥的情况,则会泛起尺度曲线不成线性,重复性欠好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

8.3 混淆要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再現性,很洪流平上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育历程中,用盖板膜封住微孔板,制止光线照射。

8.5 不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀脏]褂没嵋鹆槊舳鹊慕档汀2灰涣魇褂貌钜炫攀约梁兄械氖约痢

8.6 顯色液若有任何颜色讲明变质,应当弃之。0標准的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,体现試劑可能變質。

8.7 反映終止液为稀硫酸,制止接触皮肤。

9 貯藏及生存期

儲藏條件:試劑盒于2-8℃生存,不要冷凍。

保 质 期:该产物有效期为1年,生産日期見包裝盒。

 

【生産企業】

企業名稱:深圳williamhill体育网页版生物技術有限公司

    址:深圳市灼烁新區灼烁高新園西片區森陽電子科技園一棟6BB2

    話:0755-23499189      

    真:0755-23499025

    編:518132              

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